产品简介

衍生化技术的主要目的是增强生物样本中目标物质的可检测性，提高检测器对这些物质的响应能力。在弱碱性溶液中，OPA和3-MPA可以与氨基酸的羰基和氨基发生反应，产生成衍生物。这些衍生物在紫外光激发下会发射出比激发光波长更长的荧光。衍生物的荧光强度与其浓度成正比，从而能准确计算样品中氨基酸的含量。这种方法不仅快速、准确且灵敏度高，适用范围也相当广泛。

货号及储存条件

货号：SDK1010
名称：氨基酸衍生化试剂盒（OPA法，不含标准品）
规格：25T/50T
储存条件：2-8℃
注：如需更多信息，请联系网站负责人。

组分及实验步骤

1. 流动相A的配制：取适量超纯水，在瓶内分别溶解流动相A1、A2和A3，转移到1L容量瓶中，冲洗瓶壁1-2次以确保所有试剂被溶出，最终用超纯水定容至1L，混匀并过022μm有机相膜备用。

2. 流动相B的配制：同样处理流动相B，将其移至1L容量瓶中，冲洗瓶壁，加入400mL色谱级甲醇和400mL色谱级Y腈，最后用超纯水定容至1L，混匀并过022μm有机相膜备用。

3. 除气处理：将配制好的流动相A和B超声波处理30分钟，以去除溶剂中的气体，防止色谱柱阻塞。

4. 标准溶液的配制：准备氨基酸标准品并用0.1MHCl溶解至100μg/mL或1mM，经过022μm水相膜处理。

5. 衍生试剂的配制：将60mg试剂一与0.5mL试剂二、45mL试剂三及50μL试剂四混匀，避光保存。此配制约可得5mL衍生化试剂，可以进行25次手动衍生，具体配比需根据实验需求调整。

6. 仪器设置：开启电脑和液相色谱仪各模块（配备FLD检测器），安装C18色谱柱（46×250mm，耐水性≥90%）。在软件方法组中，设置柱温35℃，流速1mL/min，激发波长λex为340nm，发射波长λem为450nm，按洗脱程序设置运行时间60分钟，并保存方法组。

7. 进样前平衡：用初始流动相（流动相A：流动相B=90:10）平衡色谱柱30分钟或更久，待基线稳定后进样。

8. 自动衍生操作：吸取1μL氨基酸标准溶液，加入2μL衍生试剂及2μL试剂三，最大混合速度搅拌5次，静置1分钟后进行进样。

9. 手动衍生操作：若仪器无自动衍生功能，吸取100μL氨基酸标准溶液，加入200μL衍生试剂与200μL试剂三，涡旋5次（每次30秒），静置1分钟后过022μm有机相膜，再上样。

10. 空白对照：实验需同时进行空白对照，重复上述步骤使用等量0.1MHCl进行干扰排除。

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