人生就是博-尊龙凯时提供的《大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养说明书》为您详细介绍该细胞的培养条件和操作步骤。我们致力于为科研工作者提供高质量的细胞材料和培养指导。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383
生长特性：贴壁与悬浮混合生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：F12K + 20% FBS + 1% P/S
传代方法：第一次建议1:2传代，传代情况每2天换液。请注意，悬浮细胞应离心收集，而贴壁细胞需按贴壁方法处理并使用无菌离心管收集培养基，以便进行后续的过渡培养。

二、细胞处理与培养方法

运输细胞时，收到细胞后请及时培养至良好状态，并灌满完全培养液，再封好瓶口，这是最佳的运输细胞处理办法。收到细胞后，使用75%酒精消毒细胞瓶，然后在超净台内进行无菌操作。在37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。显微镜观察细胞生长情况，并拍摄保存不同倍数的照片，第一三天的照片是售后重要依据。如未提供照片，将默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：
- 如细胞未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，保留5ml培养基，放于37℃、5% CO2孵箱中培养。
- 如细胞密度超过80%，可进行传代。对于贴壁细胞，参考以下方法：
1. 拨去培养上清液，使用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞变化，一旦大部分细胞脱落迅速加入培养基终止消化。
3. 吹打脱落细胞，吸出悬液并转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清液后补加1-2ml培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代，补充新培养基至每瓶5-8ml，放置于37℃、5% CO2培养箱中。
- 对于悬浮细胞，可选择收集细胞，1000RPM离心8-10分钟后，再补加培养液，并按1:2比例分瓶。

b. 细胞冻存：
1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察后加5ml培养基终止消化，轻轻吹打脱落细胞。
3. 将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
4. 弃去上清后，重悬细胞并加入无血清冻存液，混匀后放入冻存管，存放于-80℃冰箱，必要时转移至液氮罐。

c. 细胞复苏：
1. 从液氮取出冻存管，迅速置入37℃水浴中解冻，擦拭外壁后处理。
2. 将冻存管中细胞转移至含5ml培养基的离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬细胞并接种至T25培养瓶中，再次放入培养箱，并于第二天更换新鲜培养基。

四、注意事项

在运输过程中，细胞有可能因贴壁不牢而脱落，此现象属正常。如有大量脱落，请收集培养液并进行相应处理再分瓶传代。

五、售后条款

1. 可重发情况：
- 涉及细胞运输途中问题、细胞污染、活性问题等，详细要求需提供实验结果及照片。
2. 不予重发情况：
- 包括客户造成的污染、不当操作、非推荐培养体系等情况。

我们深知细胞培养的复杂性，人生就是博-尊龙凯时愿为您的研究提供最周全的支持，确保您获得最佳的实验结果。如有任何问题，请及时与我们联系。