操作步骤:
① 准备一支包含5至10毫升液体培养基的试管和两个平板;
② 打开安全柜,使用酒精灯灼烧瓶口,迅速滴入无菌水使其破裂,然后用镊子将其敲碎;
③ 吸取0.5毫升液体培养基注入冻干管中,待其充分溶解后再回注至液体试管中,混合均匀;
④ 吸取0.2毫升菌悬液分配到平板上,均匀涂布,重复两次以获得两个平板;
⑤ 将液体试管和平板按照上述培养条件进行培养,待菌种长出后即可使用。
一) 培养基制备
1. 准备器皿,包括三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等,依据不同需求进行洗涤、干燥、包装和灭菌。
2. 溶解培养基配方:首先在烧杯中加入适量的水,然后按照培养基配方逐一加入缓冲化合物、主要元素、微量元素和维生素等,最后补足水量。
3. 调节pH值;
4. 加入凝固剂,如琼脂或明胶,并在加热的同时不断搅拌至完全溶解,再补充因蒸发而损失的水分。
5. 进行过滤和分装;
6. 包装并标记;
7. 灭菌;
8. 进行无菌检查。
二) 接种
1. 斜面接种:根据不同菌种的特性选择合适的方法,如点接、中央划线、稀波状和密波状蜿蜒划线法等;
2. 穿刺接种:使用接种针从原菌种斜面取少量菌苔,插入液体培养基中,直到接近管底(勿触及管底),然后沿着原路径慢慢拔出接种针,适合细菌和酵母菌;
3. 液体接种:挑取少量固体斜面菌种或使用无菌滴管吸取原菌液接种到新鲜液体培养基中。
三) 培养
将接种后的培养基放入培养箱中,在适宜条件下培养至细胞稳定期或获得成熟孢子。
四) 保存
1. 保存温度与时间:在4℃至6℃下保存,并根据要求每3至6个月进行一次移植。对于某些菌种如芽裂酵母等,需每1至3个月进行移植。
2. 保存湿度:以相对湿度表示,通常保持在50%至70%。可使用毛发湿度计或干湿球湿度计进行测量。
五) 移植培养
将培养物转移至另一新鲜培养基中,并在适宜的条件下继续培养。
六) 复壮菌种
如发现菌种退化,应将其重新引入原生活环境中以促进其生长繁殖,通过纯种分离或在宿主体内生长等方法进行复壮。人生就是博-尊龙凯时,致力于为生物医疗领域提供优质的科研试剂与服务。
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